La descalcificación es un proceso crucial en histología que implica la eliminación de iones de calcio del tejido óseo para permitir la creación de secciones delgadas para el examen patológico. Este proceso es necesario porque la presencia de calcio puede dificultar el corte y la tinción del tejido óseo, comprometiendo potencialmente la calidad de los portaobjetos histológicos.La descalcificación se emplea comúnmente en el diagnóstico y estadificación de diversos cánceres, incluidos los de mama, próstata y pulmón, que frecuentemente metastatizan en el tejido óseo. También es fundamental para la evaluación precisa de linfomas, leucemias y otras afecciones que afectan la médula ósea.
Métodos de descalcificación
Existen dos métodos principales de descalcificación: químico y quelante.
Descalcificación química
La descalcificación química implica el uso de ácidos fuertes, como el ácido nítrico y el ácido clorhídrico, para disolver las sales de calcio y eliminarlas del tejido. Estos ácidos actúan rápidamente, pero también pueden dañar la morfología de los tejidos delicados y afectar negativamente a las pruebas auxiliares posteriores, especialmente si se requiere un análisis de ADN o ARN.El ácido del estómago es un agente descalcificante químico más suave y menos dañino para los tejidos en comparación con los ácidos nítrico y clorhídrico. Sin embargo, también actúa más lentamente, lo que puede prolongar el proceso de descalcificación.
Descalcificación quelante
La descalcificación quelante utiliza agentes como EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) para unirse a los iones de calcio y eliminarlos del tejido. El EDTA es un método más suave en comparación con la descalcificación química y es menos probable que dañe el ADN y el ARN, lo que lo hace adecuado para pruebas moleculares posteriores.
Elegir un método de descalcificación
La elección del método de descalcificación depende de varios factores, incluido el tipo de muestra, la velocidad deseada de descalcificación y los requisitos específicos de las pruebas posteriores.Para muestras que requieren una descalcificación rápida, como las que se necesitan para un diagnóstico urgente, puede preferirse la descalcificación química utilizando ácidos fuertes. Sin embargo, si la preservación de la morfología del tejido y los ácidos nucleicos es crucial para pruebas posteriores, la descalcificación quelante con EDTA es una mejor opción.Es importante tener en cuenta que diferentes laboratorios pueden tener sus propios protocolos de descalcificación preferidos según su flujo de trabajo específico y los tipos de muestras que reciben.
Impacto de la descalcificación en la tinción
La descalcificación puede tener diversos efectos sobre la tinción, según el método utilizado y los anticuerpos o tintes específicos empleados.
Inmunohistoquímica (IHC)
IHC es una técnica ampliamente utilizada para identificar proteínas específicas en secciones de tejido. Algunos estudios sugieren que la descalcificación puede mejorar la tinción IHC al facilitar la penetración de los anticuerpos, mientras que otros indican que puede disminuir la intensidad de la tinción, particularmente para ciertos anticuerpos.Se recomienda validar los ensayos IHC en tejidos descalcificados para garantizar que los resultados de la tinción sean confiables y reproducibles.
Marcadores predictivos
Los marcadores predictivos, como ER/PR, HER2 y PD-L1, son cruciales para guiar las decisiones de tratamiento en diversos cánceres. Estos marcadores suelen evaluarse mediante IHC y es esencial garantizar que la descalcificación no afecte negativamente a su tinción.Los fabricantes de pruebas de marcadores predictivos aprobadas por la FDA generalmente recomiendan no realizar estas pruebas en tejidos descalcificados. Sin embargo, si la descalcificación es inevitable, es aconsejable validar los resultados de la tinción para demostrar que son comparables a los obtenidos de tejidos no descalcificados.
Histoquímica enzimática
La histoquímica enzimática se utiliza para detectar enzimas específicas en secciones de tejido. La descalcificación ácida puede inhibir la tinción de ciertas enzimas, como las esterasas y la TrAP, mientras que la descalcificación quelante con EDTA no parece tener tales efectos adversos.
Pruebas moleculares
Las pruebas moleculares, incluida la hartización de NC2, la citogenética y la FISH (hibridación fluorescente in situ), requieren la preservación de los ácidos nucleicos en el tejido. Los ácidos fuertes utilizados en la descalcificación química pueden degradar los ácidos nucleicos, comprometiendo la precisión de estas pruebas.La descalcificación quelante basada en EDTA generalmente se prefiere para muestras destinadas a pruebas moleculares, ya que minimiza el daño a los ácidos nucleicos.
Validación e informes
La validación es crucial para garantizar que la descalcificación no comprometa la precisión y confiabilidad de los resultados de la tinción, especialmente para pruebas críticas como marcadores predictivos y pruebas moleculares.La validación implica comparar los resultados de tinción obtenidos de tejidos descalcificados con los de tejidos no descalcificados utilizando los mismos anticuerpos o sondas. Generalmente se considera aceptable una tasa de concordancia de al menos el 90%.Es importante informar en los informes de patología que el tejido fue descalcificado y que cualquier prueba realizada en tejido descalcificado ha sido validada o puede tener limitaciones debido a la descalcificación.
Conclusión
La descalcificación es un proceso esencial en histología que permite la preparación de secciones delgadas de tejido óseo para el examen patológico. La elección del método de descalcificación depende de los requisitos específicos de la muestra y de las pruebas posteriores que se realizarán.Comprender el impacto potencial de la descalcificación en la tinción es crucial para garantizar resultados de diagnóstico precisos y confiables. Los estudios de validación son esenciales para demostrar que los resultados de tinción obtenidos de tejidos descalcificados son comparables a los de tejidos no descalcificados.Al seleccionar cuidadosamente el método de descalcificación adecuado e implementar procedimientos de validación rigurosos, los patólogos y profesionales de laboratorio pueden garantizar la calidad óptima de los portaobjetos histológicos y la interpretación precisa de los resultados de la tinción, lo que en última instancia contribuye a una mejor atención al paciente.
